Диагностика Helicobacter pylori: антитела, дыхательный тест и биопсия

Бактерии Helicobacter pylori повреждают поверхностный эпителий желудка и вызывают воспаление. Чаще всего обнаруживаются у пациентов с язвенной болезнью желудка (в 60-80 % случаев) и двенадцатиперстной кишки (90-100 % случаев).В настоящее время диагностика хеликобактериоза не представляет трудностей.

Чтобы выявить инфицирование бактериями, нужно сдать анализ крови из вены или пробы выдыхаемого воздуха (аэротест). В период обострения заболеваний желудка и двенадцатиперстной кишки назначается гастроскопия (ФГДС), при проведении которой врач-эндоскопист может взять участок слизистой (биоптат) для экспресс-теста или морфологического исследования на наличие Helicobacter pylori.

Методы диагностики

Анализ крови на антитела к Helicobacter pylori

Преимущества

• доступен всем пациентам;
• не сопровождается выраженным дискомфортом и стрессом при проведении процедуры (инъекционный метод забора крови);
• прием лекарственных препаратов, применяемых для лечения заболеваний желудка и двенадцатиперстной кишки, не оказывает влияние на результат исследования.

Подготовка

Процедура забора крови проводится утром натощак.

• За сутки до исследования из рациона исключается жирная пища.
• Курение прекращают за 8 часов до анализа.

Проведение процедуры

Забор крови производится путем венепункции. Материал отбирают в стерильную вакуумную пробирку с активатором свертывания для быстрого отделения сыворотки. Кровь доставляется в лабораторию в течение 2 часов. Микропробирки с сывороткой разрешается хранить в холодильнике при температуре 2-8 °С или в морозильной камере при -20 °С до 10 суток.

Особенности метода

Для выявления бактерий применяется иммуноферментный анализ – ИФА. Это лабораторный метод предполагает исследование сыворотки крови. Путем химических реакций врачи определяют наличие в ней антител – специфических белков иммунологической природы, выделяющихся при воздействии на организм человека различных антигенов, не знакомых ему (чужеродных бактерий, вирусов, грибов, токсинов, аллергенов и т. д.). Helicobacter pylori является инфекционным возбудителем гастропатологии. При попадании в желудочно-кишечный тракт он активирует систему иммунитета и вызывает выработку антител – иммуноглобулинов (Ig). ИФА помогает диагностировать наличие или отсутствие данной инфекции.

Бывают ситуации, когда обнаруженные антитела в сыворотке крови является ложноположительным результатом. Это может быть связано с длительным циркулированием в плазме иммуноглобулинов после уничтожения бактерий вследствие эрадикационной терапии. Антитела присутствуют в крови в течение месяца после лечения, а у некоторых остаются пожизненно. В другом случае все наоборот. Инфицирование есть, а антитела в сыворотке крови не определяются (ложноотрицательный результат). Это может быть связано с ранним периодом после заражения. Антитела не успевают выработаться из-за слабого иммунного ответа. Чтобы избежать неточностей в результатах, необходимо дополнительно исследовать фракции иммуноглобулинов 3 видов: M, G, A.

Характеристики специфических белков крови:

• IgM – определяется сразу после заражения, до выявления IgG.
• IgG – вырабатывается через 3-4 недели после попадания в организм инфекционного «агента». Концентрация данного класса иммуноглобулинов напрямую зависит от начала эрадикационной терапии. Ложноположительный результат на антитела к Helicobacter pylori сохраняется в течение месяца после полного уничтожения возбудителя.
• IgA – секреторный иммуноглобулин. Может определяться в крови, слюне и желудочном соке. Свидетельствует о степени выраженности воспалительного процесса. Появляется в крови через 2-3 недели от момента заражения, может циркулировать в течение нескольких лет.

Расшифровка анализа

Существует качественное и количественное определение антител к Helicobacter pylori. В первом случае диагностируют наличие специфических иммуноглобулинов, а во втором их концентрацию. При качественном анализе определяются суммарные антитела (IgM, IgG, IgA). При количественном исследовании используют нормы содержания специфических белков в крови.

У каждой лаборатории свои референсные значения, применяемые для определенного вида реактивов.

Возможны сомнительные результаты исследования. В таких случаях анализ на антитела к Helicobacter pylori повторяют через 2-3 недели.

Дыхательный уреазный тест на Helicobacter pylori

Преимущества

• помогает выявить даже низкие концентрации возбудителя;
• безопасный метод, не сопровождается радиоактивной нагрузкой на пациента (при использовании тестовых растворов мочевины, меченой нерадиоактивными изотопами);
• оценивается процент бактерий на всей поверхности слизистой желудка;
• удобен для пациентов (неинвазивный метод);
• дыхательный уреазный тест с раствором карбамида разрешен беременным и младенцам;
• является точным диагностическим исследованием.

Подготовка

1. Дыхательный уреазный тест проводится натощак. Перед исследованием с утра можно почистить зубы без применения ополаскивателей и освежителей для полости рта. Не рекомендуется использовать жевательные резинки.
2. Накануне забора проб разрешен легкий ужин. С 22 часов вечера и до начала процедуры есть нельзя, питье отменяют за час до исследования.
3. За 2-3 дня до аэротеста запрещен прием алкоголя (пары алкоголя искажают результаты проб). Также на этот период исключаются продукты, вызывающие метеоризм (капуста, бобовые, чеснок, яблоки, грибы, черный хлеб и другие).
4. Курение прекращают за 8 часов до начала процедуры.
5. За 2 недели до исследования отменяют препараты висмута («Де-нол», «Викалин», «Викаир»), ингибиторы протонной помпы («Омез», «Нольпаза», «Нексиум» и другие). Данные средства угнетают активность уреазы.
6. За неделю до проведения теста прекращают прием нестероидных противовоспалительных и антибактериальных препаратов.
7. За 2 дня до процедуры исключаются лекарственные средства из группы блокаторов Н₂ – гистаминовых рецепторов («Гистодил», «Примамет», «Ранитидин», «Фамотидин» и другие).
8. Разрешены препараты, снижающие избыточную продукцию соляной кислоты желудком (антациды – «Алмагель», «Фосфалюгель», «Маалокс», «Гевискон» и т. д.).

Специфичность метода

Дыхательный уреазный тест на Helicobacter pylori связан с особенностями жизнедеятельности бактерии. Возбудитель в процессе своего существования выделяет защитный фермент – уреазу. Это биологически активное соединение помогает микроорганизму справляться с агрессивным воздействием соляной кислоты, выделяемой в составе желудочного сока. В процессе пищеварения уреаза расщепляет продукт метаболизма белков – мочевину. В результате образуется аммиак и углекислота. Эта химическая реакция стала основой для аэротеста. При дыхании пациента можно измерить концентрацию углекислого газа в выдыхаемом воздухе.

Разновидности дыхательного уреазного теста на Helicobacter pylori:

• Аэротест с применением тестового раствора или драже мочевины, меченой радиоактивным углеродом (¹⁴С). Данный метод применяется редко из-за лучевой нагрузки на организм человека.

Проведение процедуры:

Пациент дышит через специальную трубку, находящуюся глубоко в ротовой полости. Дыхание должно быть ровным и спокойным. Трубка подсоединяется к специальному газовому спектрометру, замеряющему процент меченого углекислого газа в выдыхаемом воздухе. В начале процедуры берут 2 фоновые пробы аэротеста. Затем пациенту дают выпить тестовый раствор или проглотить специальное драже с мочевиной, меченой радиоактивным изотопом. Через каждые 15 минут (в течение часа) осуществляют забор дополнительных 4 проб выдыхаемого воздуха. Не допустимо попадание слюны в трубку, результат исследования может стать недостоверным. В этом случае пробу придется повторить через 40-60 минут после предыдущей. Чтобы избежать неприятной ситуации, трубку во время процедуры необходимо периодически вынимать, а слюну сглатывать.

• Дыхательный уреазный тест с применением стабильного раствора мочевины, меченой нерадиоактивным углеродом (¹³С). Данный метод является «золотым стандартом» в диагностике хеликобактериоза (подробнее о методе см. здесь).

Проведение процедуры:

Во время исследования осуществляют забор 2 проб выдыхаемого воздуха. Процедура проводится на голодный желудок, в положении сидя. Пациент делает глубокий вдох и на несколько секунд задерживает дыхание. Затем выдыхает в герметичный одноразовый пакет, который сразу же плотно закрывают. Пациенту дают выпить тестовый раствор мочевины, меченой нерадиоактивным изотопом. Через полчаса осуществляют повторный забор выдыхаемого воздуха. С помощью масс-спектрометра измеряют концентрацию углекислоты в выдыхаемом воздухе. Полученные результаты сравнивают и делают выводы о наличии инфицирования.

• Аэротест с применением раствора мочевины (карбамида). Данная методика не является максимально точной. Рекомендуется для диагностики хеликобактериоза у беременных женщин и маленьких детей.

Проведение процедуры:

Методика схожа с предыдущим тестом. У пациента делают забор 2 проб выдыхаемого воздуха. Измеряют концентрацию углекислого газа до и после применения тестового раствора карбамида.

Расшифровка результатов аэротеста на Helicobacter pylori

Уреазный экспресс-тест на Helicobacter pylori

Во время проведения Во время проведения гастроскопии (ФГДС) врач-эндоскопист берет кусочек слизистой из любого отдела желудка. Биоптат помещают на реагентную тест-полоску, обработанную раствором мочевины. Под действием фермента уреазы, выделяемой бактериями Helicobacter pylori, происходит ощелачивание среды. Мочевина расщепляется. Вследствие этого индикаторная полоска меняет свою окраску – с желтой на малиновую. Тест считается положительным. От скорости изменения цвета реагента зависит выраженность воспалительного процесса и концентрация возбудителя в биоптате.

Оценка полученного результата:

• Helicobacter pylori (+) – слабое инфицирование (реагентная тест-полоска изменила свой цвет в течение суток).
• Helicobacter pylori (++) – умеренный инфекционный процесс (реагентная тест-полоска изменила свой цвет в течение 2-3 часов).
• Helicobacter pylori (+++) – тяжелое инфицирование (реагентная тест-полоска изменила свой цвет в течение одного часа).

Биопсия с исследованием материала

Преимущества

• наиболее точный метод диагностики Helicobacter pylori (специфичность до 100%);
• исключает возможность ложноположительных результатов, подтверждает наличие инфекции.

Подготовка

1. Процедура ФГДС предусматривает 3-х дневную диету с исключением продуктов, раздражающих пищеварительный тракт (нельзя жареные, копченые, соленые, жирные и острые блюда).
2. Запрещаются газированные напитки, кофе, алкоголь.
3. Диета бесшлаковая на основе легкоусвояемого меню (каши на воде, отварное мясо, йогурты, овощные салаты и т. д.). Последний прием пищи за 12 часов до проведения ФГДС.
4. За 3 часа до начала исследования необходимо отказаться от сигарет.
5. Нельзя принимать лекарства перед эндоскопической процедурой.
6. Прием жидкости прекращают за 1-2 часа до начала исследования.
7. Не разрешается перед процедурой чистить зубы, применять ополаскиватели или освежители для полости рта, а также жевательные резинки.
8. Гастроскопия проводится на голодный желудок.

Проведение процедуры

ФГДС сопровождается введением специального зонда в желудок. Процедура неприятна из-за диспепсических проявлений. Во время проглатывания зонда происходит раздражение рецепторов ротоглотки, и пациент испытывает чувство тошноты и рвотные позывы. Длительность процедуры обычно не превышает 10-15 минут. За это время специалист осматривает слизистую желудка и двенадцатиперстной кишки, выявляет очаги воспаления (эрозии, язвы, дефекты и т. д.) и проводит забор материала для последующего морфологического исследования.

Для бактериологического посева биоптата на питательную среду потребуется не менее 5 образцов тканей. Их помещают в стерильные пробирки с транспортным раствором. Затем доставляют в бактериологическую лабораторию. Helicobacter pylori выращивают на питательных средах в течение 3-6 дней, иногда дольше (до 12 суток).

Гистологическое исследование мазков-отпечатков, полученных из биоптатов слизистой желудка, является «золотым стандартом» среди инвазивных методов диагностики хеликобактериоза. Участки тканей при ФГДС берут с неповрежденного эпителия (исключают эрозивно-язвенные дефекты). Helicobacter pylori живет на здоровой слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки. Затем полученные мазки-отпечатки окрашивают (по Романовскому-Гимзе, по Граму или другими красителями). Производят микроскопию. Бактерии обнаруживаются в желудочной слизи, располагаются свободно. Helicobacter pylori имеет характерные для него изогнутые формы: спиралевидную, в виде буквы «S» или распахнутых крыльев птицы.

Оценка результатов биопсии

Резюме

Таким образом, существует 2 точных диагностических метода выявления хеликобактериоза. Они являются «золотым стандартом» в современной гастроэнтерологии. Первый метод – неинвазивный: дыхательный уреазный тест с раствором мочевины, меченой нерадиоактивным углеродом; второй – инвазивный: ФГДС с биопсией и последующим гистологическим изучением образцов тканей.

Для подтверждения инфицирования Helicobacter pylori требуется не менее 2 различных исследований. Диагноз ставят на основании клинической симптоматики и результатов, полученных в процессе лабораторных и эндоскопических мероприятий.

Источники

1. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИИ HELICOBACTER PYLORI В КЛИНИЧЕСКИЙ ПРАКТИКЕ Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина» Бордин Дмитрий Станиславович Войнован Ирина Николаевна Колбасников Сергей Васильевич Эмбутниекс Юлия Викторовна
2. Лечение хронического Helicobacter pylori-индуцированного гастрита с эрозиями желудка, ассоциированного с вирусом Эпштейна – Барр. Т. Е. Афанасенкова, Е. Е. Дубская 2022-02-16
3. Циммерман Я.С., Вологжанина Л.Г. Морф. картина и контаминация слизистой оболочки ж-ка и нижней трети пищевода Helicobacter pylori у больных ЯБ ДПК в фазе рецидива, протекающей в сочетании с ГЭРБ. Тезисы VI съезда НОГР. –М. – 2006. – 290с.
4. ХЕЛИКОБАКТЕРИОЗ ОПЕРИРОВАННОГО ЖЕЛУДКА. Журнал Научное обозрение. Медицинские науки. – 2017. – № 6 – С. 24-28 Дата публикации 08.02.2018. Давыдкина М.А., Пигачев А.В., Чапаев Н.А., Беляева Н.А.
5. Сравнительные данные применения некоторых современных методов исследования в диагностике Helicobacter pylori Опубликовано в журнале: Российский Гастроэнтерологический журнал »» № 2’99 ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ А.С. Логинов, Ю.В. Васильев, С.А. Зеленикин, В.И. Касьяненко Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии. Москва
6. Габибов Р.С., Дадамов Р.А., Ахмедов Т.С. Проблемы распространения, патогенеза, диагностики и лече-ния хронического гастрита и язвенной болезни, ассоциированных с инфекцией Helicobacter pylori. Доказательная гастроэнтерология. 2017;6(4):20‑24.
7. МОНИТОРИНГ HELICOBACTER PYLORI ИНФЕКЦИИ В КАЗАНИ. Журнал Фундаментальные исследования. – 2012. – № 12 (часть 2) – С. 270-273 Дата публикации 29.11.2012. Исаева Г.Ш., Бурханов Р.Р., Ефимова Н.Г., Селькова Е.П.
8. Диагностика и лечение инфекции Helicobacter pylori – отчет согласительной конференции Маастрихт IV/ Флоренция // Вестник практического врача. Спецвыпуск 1. 2012. С. 6-22.